1. 分子骨架與剪切版本

• 全長 CD163：1150 aa，胞外區 9 個 SRCR 結構域

• sCD163：主要片段 SRCR1-3，分子量 130 kDa；金屬蛋白酶 ADAM10 在 Ala741-Val742 剪切，釋放效率 12 %/h

• 糖基化占比：N-糖 14 位，O-糖 35 位，總質量 22 %；去糖基化后 SDS-PAGE 降 25 kDa，活性不變，檢測表位可能丟失

2. 校準品溯源鏈

• WHO 參考品：NIBSC 19/118，濃度 100 ng/mL，采用 SEC-HPLC 定值，擴展不確定度 8 %

• 企業工作校準：與 WHO 平行比對，偏差 ≤±5 %，溯源報告隨試劑盒附帶，審稿人常查

3. 檢測平臺對比參數

4. 關鍵表位定位

• 捕獲抗體 6C3：SRCR2 的 Glu325-Pro335，識別還原與非還原態，不受糖基化影響

• 檢測抗體 8B6：SRCR3 的 Cys412-Cys427，依賴二硫鍵構象；樣品煮 5 min 信號降 90 %，ELISA 嚴禁加熱處理

5. 穩定性硬核數據

• 血清：25 ℃ 放置 24 h，濃度 +8 %；4 ℃ 7 天，-4 %；-80 ℃ 24 個月，-6 %

• EDTA 血漿：sCD163 與鈣離子無關，結果與血清差異 <3 %；肝素血漿平均低 10 %，因 ADAM10 活性被抑制，剪切減少

• 凍融：3 次循環下降 5 %；6 次循環下降 15 %，建議分裝 ≤200 μL/管

6. 干擾與鉤狀效應

• 類風濕因子：120 IU/mL 導致 CLIA 假陽性 +0.8 ng/mL，可用 HBR 阻斷劑 0.5 mg/mL 中和

• 高劑量鉤狀：ELISA 在 500 ng/mL 出現前帶，信號倒跌 30 %；兩步法或 1:1000 預稀釋可規避

7. 參考區間與臨床灰區

• 健康成人：血清 0.7–2.3 ng/mL（CLIA，n=435，95 % 百分位）

• 慢性肝病：Fibrosis F2-F4 均值 4.8 ng/mL，取 3.0 ng/mL 為灰區，陽性預測值 78 %

• 膿毒癥：入院 >12 ng/mL 與 28 天死亡率相關，HR 2.1，Cut-off 經 ROC 優化為 11.7 ng/mL

8. 校準曲線擬合方式

• 四參數 Logistic：R2 ≥0.998；邊緣兩點剔除后 R2 仍 ≥0.995，否則整批作廢

• 低濃度錨點：0 ng/mL 孔 OD 應 ≤0.080（450 nm），高于 0.1 判定為板間污染，需重洗板或換新板條

9. 質控品允許范圍

• 高值 QC：靶值 20 ng/mL，±2 SD 17.2–22.8 ng/mL；Westgard 1-2s/1-3s 規則，觸發失控需整批重做

• 低值 QC：靶值 1.5 ng/mL，±2 SD 1.2–1.8 ng/mL；連續 10 批在 1 SD 同一側，提示系統偏移，需重新校準

10. 申報注冊常用性能指標

• 檢出限：LOD=Blank mean+3SD，申報資料需 ≥60 次獨立空白

• 線性：R ≥0.99，絕對偏差 ≤±8 %；覆蓋宣稱區間 0.15–60 ng/mL

• 可比性：與上市同類試劑回歸斜率 0.95–1.05，截距 ≤0.2 ng/mL，R ≥0.975