一、乳酸脫氫酶檢測試劑盒概念

乳酸脫氫酶檢測試劑盒是一種用于定量檢測生物樣本(如血清、血漿、細胞裂解液等)中乳酸脫氫酶活性的生物化學試劑套裝。

核心用途：

LDH活性是臨床醫學和生命科學研究中一個非常重要的標志物。檢測它的主要意義在于：

在臨床上：作為細胞損傷或死亡的“警報器”。當細胞受損(如心肌梗死、肝炎、溶血、惡性腫瘤)時，LDH會從細胞中釋放到血液中，導致血清LDH活性升高。

在科研中：常用于評估細胞毒性(如藥物、毒素的作用)、細胞增殖情況，以及研究細胞代謝狀態。

二、檢測原理：它是如何工作的?

目前絕大多數試劑盒都采用國際臨床化學聯合會推薦的連續監測法，其原理基于LDH催化的可逆化學反應。我們通常檢測的是正向反應，即乳酸轉化為丙酮酸。

反應步驟如下：

主反應(LDH催化)

乳酸 + NAD? → 丙酮酸 + NADH + H?

LDH酶催化乳酸脫氫，生成丙酮酸，同時使氧化型輔酶I轉變為還原型輔酶I。

指示反應(與主反應偶聯)

生成的丙酮酸會立即與反應體系中的另一種物質——2,4-二x基苯肼發生反應，生成丙酮酸二x基苯腙。

注意：在一些更現代、更直接的試劑盒中，這一步可能被另一種偶聯反應替代，但基本原理相通。

比色測定

丙酮酸二x基苯腙在堿性條件下呈棕紅色，且顏色的深淺與生成的丙酮酸量成正比，進而與LDH的活性成正比。

通過在450nm波長下測定吸光度的變化速率，就可以計算出LDH的活性單位(通常為 U/L 或 U/mg prot)。

簡單理解：樣本中的LDH越多(活性越高)，反應生成的有色物質就越多，溶液顏色就越深，儀器測出的吸光度值變化就越快。

三、試劑盒典型組成

一個標準的LDH檢測試劑盒通常包含以下核心組分：

組分名稱作用

緩沖液：提供最適且穩定的pH環境(通常為弱堿性)。

底物液：含有LDH反應的底物——乳酸(或其鹽，如乳酸鋰)。

輔酶I：即 NAD?，是LDH反應必需的輔酶。

顯色劑/終止液：通常是2,4-二x基苯肼，用于與丙酮酸反應生成有色物質。

標準品：已知濃度的丙酮酸標準溶液，用于制作標準曲線，保證結果準確。

說明書：詳細的操作步驟、注意事項和計算方法。

四、結果解讀：數據意味著什么?

1. 臨床意義(血清樣本)

LDH廣泛存在于人體各組織中，因此其升高不具有器官特異性，必須結合其他檢查來判斷具體病灶。

LDH升高常見于可能原因

心臟疾病急性心肌梗死(發病后12-24小時開始升高，2-3天達峰，持續7-10天)，心肌炎。

肝臟疾病急性肝炎、肝硬化、肝癌、阻塞性黃疸。

血液疾病溶血性貧血、白血病、淋巴瘤。

肌肉疾病肌營養不良、擠壓綜合征。

惡性腫瘤多種實體瘤(因其快速生長導致細胞壞死)。

其他肺部梗死、腎病、休克。

2. 科研意義(細胞樣本)

細胞毒性檢測：在細胞培養板中，藥物或毒素處理會導致細胞膜損傷，LDH釋放到上清液中。上清液中的LDH活性越高，代表細胞毒性越強/死亡細胞越多。

計算公式：細胞毒性 (%) = (實驗組LDH - 空白組LDH) / (最大酶活組LDH - 空白組LDH) × 100%

細胞增殖/存活檢測：有些方法會檢測細胞裂解后的LDH活性，因其與活細胞數量成正比。

五、注意事項

樣本類型：血清、血漿(肝素抗凝)、細胞上清液、組織分漿等。避免溶血，因為紅細胞內LDH含量高，輕微溶血都會導致結果假性升高。

線性范圍：確保樣本的吸光度值在標準曲線的線性范圍內，否則需稀釋后重測。

操作穩定性：LDH對溫度敏感，反應需在恒溫下進行。操作應迅速，避免反復凍融樣本。

不同同工酶：LDH有5種同工酶，分布在不同的器官。若需精確定位，可進行LDH同工酶電泳分析。

乳酸脫氫酶檢測試劑盒是一個成熟、高效的工具。通過一個標準的顏色反應，它將不可見的酶活性轉化為可測量的光信號，從而為醫生和科研人員提供了評估細胞損傷程度和代謝狀態的關鍵窗口。理解其原理和步驟，是正確使用和合理解讀其結果的基礎。