活性單位：IU 與 pg 的換算關系不是固定 1:10

WHO 標準品 96/602 每支 5000 IU，質量標稱 50 ng，理論 1 IU = 10 pg。不同表達體系糖型占比不同，CHO 源 TPO 比活 9.8 IU ng?1，E.coli 源僅 6.2 IU ng?1。寫實驗方案時，先問廠家要“IU 實測報告"，把濃度換算成 IU mL?1，跨品牌比較才不會差出 30 %。

比活性：≥ 1 × 10? IU mg?1 是臨床前底線

體外 Meg-01 細胞增殖 ED?? 0.8–1.2 ng mL?1，對應比活 1 × 10? IU mg?1。低于這個值，小鼠體內 50 µg kg?1 劑量血小板提升僅 30 %，達不到藥效窗口。采購重組蛋白時，把 ED??寫在合同附件，到貨復測偏差＞20 % 直接退貨。

糖基化位點：CHO 源 6 個，HEK293 源 7 個

TPO 序列 332 aa，N-糖位點 Asn 45、78、100、151、309，CHO 細胞只做前 5 個；HEK293 把 Asn 226 也做上，分子量從 60 kDa 漲到 65 kDa。糖多一圈，體內半衰期從 6 h 延長到 10 h，動物實驗劑量可降 40 %。做長效制劑優先選 HEK293 源，體外酶活實驗兩種糖型 ED?? 無差異。

內毒素：0.1 EU mg?1 是細胞實驗紅線

TPO 本身激活 TLR4，內毒素 1 EU mg?1 會讓巨噬細胞分泌 TNF-α 的 EC?? 左移 3 倍。廠家 COA 寫 ＜0.5 EU mg?1，實際 0.3 EU 就能干擾。要求到貨批批做 LAL，上限 0.1 EU mg?1，多付 8 % 費用，能省掉后續“背景過高"的重復實驗。

純度：SDS-PAGE 一條帶不夠，SEC-HPLC 聚體＜2 %

還原 SDS-PAGE 看到 35 kDa 單條帶，看似 98 % 純度，SEC-HPLC 可能藏 5 % 聚體。聚體在體內被巨噬細胞快速清除，半衰期腰斬。合同里加一條“SEC-HPLC 聚體＜2 %"，到貨復測 280 nm 面積歸一化，超標就觸發索賠，批次穩定性直接拉滿。

凍干保護：海藻糖 5 % + 0.005 % Tween-20，25 °C 加速 4 周活性掉＜5 %

凍干前加 5 % 海藻糖，形成玻璃態，阻斷蛋白聚集；0.005 % Tween-20 抑制界面變性。25 °C 加速 4 周，ED?? 偏移 4 %，不加保護劑偏移 18 %。發文章做長期穩定性，直接引用 ICH Q1A 標準，審稿人不會再要求補實驗。

摩爾消光系數：ε?.?% = 0.83，算濃度不再靠 Bradford

TPO 含 6 個 Trp、11 個 Tyr，理論 ε?.?% 280 nm = 0.83。用 A??? 直接定量，比 Bradford 法省 10 min，誤差＜3 %。實驗室沒紫外分光光度計，可用 NanoDrop 2 µL 快速測，濃度換算公式：

mg mL?1 = A??? / 0.83 × 稀釋倍數

寫在 SOP 里，新人也能一次做對。

質譜分子量：+183 Da 是 Met 氧化，-18 Da 是信號肽殘留

LC-MS 實測 60038 Da，比理論值 60020 Da 多 18 Da，說明信號肽末端多一個 Gly，未全切除。+183 Da 峰是 Met 106 氧化，活性下降 12 %。把這兩個質量差寫進質檢標準，到貨 MS 報告必須“無 +183 Da 峰，-18 Da 峰＜5 %"，批次質量直接鎖死。

儲存濃度：0.5 mg mL?1 是分界線

低于 0.5 mg mL?1，TPO 容易吸附管壁，24 h 損失 10 %。工作液先配到 1 mg mL?1，再分裝 50 µL，–80 °C 一次用完。稀釋到 10 µg mL?1 時加 0.1 % HSA 做載體，回收率拉回 95 %。