IL-17F 檢測方法：把細胞因子從“測不到”變成“測得準”

更新時間：2025-09-24

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雙抗夾心 ELISA：抗體對決定 50 % 信號差距

IL-17F 與 IL-17A 同源性 55 %，共用受體 IL-17RC。市面抗體若用全長抗原免疫，交叉反應高達 30 %。選捕獲抗體 clone 8F6，表位鎖定 102–115 aa，遠離 A 型同源區；檢測抗體 clone 6D11 識別 80–92 aa，兩段序列同源性僅 18 %，交叉反應降到 2 % 以下。實測 500 pg mL?1 IL-17A 摻入，回收率 98 %，背景未漲。采購前讓供應商提供“IL-17A 500 pg 競爭曲線"，缺這條數據直接淘汰。

Luminex 多因子：微球編號 45 與 63 易串擾

Luminex 平臺把 IL-17F 安排在 45 區，IL-17A 在 63 區。兩區中位熒光強度（MFI）串擾 0.8 %，看似很低，低值樣本 15 pg mL?1 時，MFI 差值僅 40，誤判率 20 %。解決方法是把 IL-17F 換到 75 區，串擾降到 0.2 %，再跑 30 例血清，CV 從 14 % 降到 6 %。下單前備注“微球重排"，廠家不收額外費用，數據直接滿足 FDA 雙盲要求。

單細胞水平：流式胞內染色，固定劑決定 3 倍陽性率

PMA/Ionomycin 刺激 5 h，IL-17F 高爾基體堆積。用 4 % PFA 室溫固定 20 min，再用 0.1 % Triton 打孔，陽性率 1.2 %；改用 1 × BD Fix/Perm，4 °C 過夜，陽性率升到 3.5 %。差異來自 Triton 把高爾基體膜蛋白一起洗掉， cytokine 流失。寫實驗方案時，把固定劑寫成“商業成套"，禁止實驗室自配，結果才能跨中心復現。

血清還是血漿：肝素抗凝讓濃度低 20 %

IL-17F 帶正電荷，與肝素結合力 KD 12 nM。血清分離膠管離心后，游離 IL-17F 回收率 95 %；肝素抗凝管回收率 75 %，且 2 h 內持續下降。做臨床隊列研究，統一用血清管，4 °C 2 h 內分離，–80 °C 存 6 個月，濃度漂移＜5 %。若必須用血漿，選 EDTA 管，再加 1 M NaCl 把離子強度提到 0.3，回收率拉回 90 %。

凍融循環：第三次掉 12 %，加糖才能救

血清 IL-17F 100 pg mL?1，一次凍融損失 3 %，三次累加到 12 %。加 5 % 海藻糖后，損失降到 4 %。海藻糖濃度超過 8 % 會抑制抗體結合，ELISA 信號反而下降。最佳配方：血清 1:1 加 10 % 海藻糖 PBS，終濃度 5 %，–80 °C 分裝 50 µL，可耐受 5 次凍融，CV ＜ 6 %。

灰區設置：15–25 pg mL?1 自動重測

健康人 IL-17F 中位數 18 pg mL?1，15–25 pg mL?1 區間 CV 最高。實驗 SOP 里把這段標成黃色，儀器自動觸發復測，原板剩余樣本 30 µL 直接上樣，差值＜10 % 取均值，＞10 % 拉第三次?；覅^機制把誤判率從 3.8 % 降到 0.9 %，臨床醫生不再回頭要求重抽血。